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離子交換樹脂法

離子交換法是利用離子交換劑與溶液中的離子之間所生的交換反應(yīng)來進(jìn)行分離的，分離的效果較好，廣泛用于微量組分的富集。一般流程為：鮮蛋一預(yù)處理一攪拌吸附一上柱洗脫一等電點沉淀一透析一噴霧干燥一成品。

溶菌酶在等電點以下較廣泛的pH值范圍內(nèi)，分子帶正電荷，可吸附于弱酸性陽離子交換樹脂上，洗脫后鹽析，可得溶菌酶沉淀，再進(jìn)行精制可得成品。蛋清吸附724樹脂，洗滌緩沖液洗脫，硫酸銨溶液鹽析透析，用NaOH去堿性蛋白，凍干溶菌酶，凍干粉沉淀干燥得到溶菌酶。在5—10℃下，將新鮮蛋清540kg加入到已處理好的80kg 724樹脂中，攪拌吸附6h，在0—5℃靜置過夜。傾出上層蛋清，樹脂離心甩干，用蒸餾水反復(fù)洗去黏附的卵蛋白，然后將樹脂裝入柱內(nèi)，用0.15mol/L、pH=6.5磷酸緩沖溶液約150L洗滌樹脂，再用約600L的10%硫酸銨溶液洗脫，收集洗脫液。洗脫液中加硫酸銨，使最終含硫酸銨量為40%，有白色沉淀生成，冷處放置過夜。虹吸上層清液，沉淀吸濾抽干，再用1倍蒸餾水溶解沉淀呈稀糊狀，然后裝入透析袋，在約5℃的條件下，對蒸餾水透析24h左右，中間換水2—3次。離心去除沉淀，沉淀再用少量水洗一次，洗液與離心液合并。再往透析清液中慢慢加入1mol/L氫氧化鈉溶液，同時不斷攪拌，使pH值上升到8.0—9.0，如有白色沉淀，即離心除去。然后用3mol/L鹽酸調(diào)pH=5.0，冷凍干燥，即得白色片狀溶菌酶。也可將離心液用3mol/L鹽酸調(diào)pH=3.5，在攪拌下緩慢加入5%的固體氯化鈉，在約5℃的溫度下靜置48h，離心，沉淀用0℃丙酮洗滌，干燥，即得溶菌酶。